中国对虾(Penaeus chinensis)酚氧化酶的分离纯化及其部分生物化学性质

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1青岛海洋大学海洋生命学院海洋生物系,青岛,266003


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以中国对虾(Penaeus chinensis)的血淋巴为材料, 利用凝胶过滤和离子交换等方法, 对酚氧化酶(phenoloxidase, E. C. 1.10.3.1)进行了分离纯化和生物化学性质研究. 实验发现, 酚氧化酶原(prophenoloxidase)的分子量为87.5 kD左右, 在实验操作过程中极易发生降解或自身降解, 变成有活性的大小约77 kD的酚氧化酶, 10 g/L SDS可使该酶原全部被激活而成为有活性的酚氧化酶. 以L-二羟苯丙氨酸(L-DOPA)为特异性底物对酚氧化酶活性进行研究发现, 其最适pH值为6.0左右, 最适温度为40 ℃, Km值约为 1.99 mmol/L. 利用多种氧化酶抑制剂对酚氧化酶纯化样品的酶活性进行研究, 发现抗坏血酸(ascorbic acid)、 半胱氨酸(cysteine)和二硫苏糖醇(dithiothreitol)对酚氧化酶活性具有很强的抑制作用, 硫脲(thio urea)对酚氧化酶活性也具有较强的抑制作用, 而酚氧化酶对苯甲酸(benzoic acid)、柠檬酸(citric acid)和亚硫酸钠(sodium sulfite)不敏感, 而且该酶对酪氨酸等单酚还具有高特异性的酚氧化酶活性, 表明它可能是一种酪氨酸酶型的酚氧化酶; 此外, 该酶对EDTA和金属离子非常敏感, 其活性能被Cu2+强烈抑制, 被Mg2+强烈激活, 表明该酶很可能是一种金属酶(metalloenzyme).

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语种: 英文   

基金教育部高校骨干教师资助计划(160004)

关键词中国对虾 酚氧化酶 L-DOPA 酪氨酸酶 金属酶


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