OVA-接头-β2m融合基因的构建及体内特异性CTL 的诱导

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1上海第二医科大学分子生物学实验中心,上海,200025


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构建融合基因OVA-接头-β2m的表达载体, 通过接头(linker)序列使β2微球蛋白(β2m)与肽段共价结合, 限制其在体内的扩散, 以期获得更具潜力的免疫原结构. 采用PCR技术, 从人肝癌细胞株SMMC-7721中克隆人β2m基因, 拼接上卵白蛋白(OVA) (257-264)序列及接头后, 克隆入pET-42b( + )高效表达载体进行诱导表达. 对表达产物进行纯化与复性后, 用其作为免疫原诱导特异性CTL, 并构建H-2Kb四聚体检测特异性CTL. 应用H-2Kb四聚体对特异性CTL检测结果与经典的细胞毒试验一致, 同时对胞外IFN-γ进行了定量检测. 结果表明, OVA-接头-β2m的表达产物可有效诱导体内特异性CTL反应, 在体外构建MHC-I类分子四聚体, 为特异性T细胞的检测提供了有利的工具.

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语种: 英文   

基金国家自然科学基金(30171048)

关键词四聚体 基因表达 纯化 复性 CTL


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